Caracterización genética de pacientes peruanos con diagnóstico clínico de distrofinopatía y validación de la técnica MLPA como prueba molecular diagnóstica confirmatoria Centro de Investigación de Genética y Biología Molecular 2014-2016

Abstract

El objetivo principal del presente trabajo fue validar la utilidad diagnóstica de la prueba MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) para diagnóstico de pacientes con una distrofinopatía (tipo Duchenne-DMD, o Becker-DMB), caracterizándose primero a los pacientes. Se utilizó la información clínica de 46 pacientes que fueron referidos al CIGBM entre los años 2014-2016 para descarte de DMD/DMB. Se determinó el genotipo de las muestras, primero mediante la técnica MLPA (grandes deleciones y duplicaciones) y en los casos negativos, se usó NGS-target (pequeñas mutaciones). Finalmente se usó STATA 12.0 para análisis descriptivo y EPIDAT 3.1 para análisis de precisión diagnóstica. Se resolvieron el 56.5% de los casos por MLPA y el resto por NGS-target más secuenciación Sanger. De las 42 mutaciones diferentes encontradas, 11 no han sido reportadas antes. Se establece la distribución mutacional del gen DMD: grandes deleciones (45.65%), grandes duplicaciones (8.70%) y pequeñas mutaciones (45.65%), que es significativamente diferente en esta población versus lo reportado por la Universal Mutation Database-Translational Research in Europe for the Assessment and Treatment-Neuromuscular Disorders. Se demuestra que la técnica MLPA tiene una sensibilidad y especificidad del 100% para detectar mutaciones de tipo deleción/duplicación, causantes de DMD/DMB. Se recomienda realizar el diagnóstico de la DMD/DMB en dos partes. Primero por MLPA, considerando verificar por PCR más secuenciación Sanger en caso de tratarse de deleción de un solo exón. Y posteriormente, en MLPA negativos, realizar NGS y verificar los resultados también por secuenciación Sanger.